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ibidi流體剪切力實(shí)驗(yàn)應(yīng)用逐步說明了如何串聯(lián)連接多個Luer-Slides。優(yōu)點(diǎn)是僅使用一個流體單元即可觀察和培養(yǎng)多個載玻片。當(dāng)使用相同規(guī)格的載玻片時,載玻片中的流速是相同的。也可以通過連接不同高度的載玻片來改變剪切速率。
本次介紹了兩個載玻片連接的過程。但是它可以應(yīng)用于大量的載玻片。
將一個塑料連接器插入通道載玻片的兩端(6厘米),以在載玻片之間連接起來。下圖是在兩端帶有兩個配套的Luer公接頭的連接器管。可用乙醇或高壓滅菌消毒接頭。
*必須在無菌條件下執(zhí)行以下步驟!
3. 播種細(xì)胞
· 準(zhǔn)備1.67 · 106 cells/ml.的細(xì)胞懸液。
· 將150 µl注入通道。僅填充通道體積(圖1a)。
· 將帽蓋在Luer接頭上,并將載玻片放在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)半小時來固定細(xì)胞。
· 細(xì)胞固定后,將兩邊儲液接口各加60 µl充滿。
4. 連接載玻片
現(xiàn)在準(zhǔn)備載玻片,使細(xì)胞在通道中生長,并向儲液池中填充60 µl無細(xì)胞培養(yǎng)基(請參見第3節(jié))。
· 在連接之前,將所有儲液器各加60 µl(圖1b)。
· 將連接器管的一個Luer適配器插入載玻片的一個母Luer適配器中(圖1c)。
· 將一些預(yù)備的培養(yǎng)基吸入注射器。倒轉(zhuǎn)注射器并將多余的空氣推出(圖1d)。
· 使用沒有氣泡的注射器在載玻片端口注入。可能會有些溢出(圖1e)。
小心地將液體注入載玻片,直到連接器管中充滿為止(圖1f)
圖1:(a)接種細(xì)胞時的用量; (b)載玻片在連接之前已*填滿; (c)載玻片中插入連接管; (d)無氣泡的注射器; (e)將注射器插入載玻片一端; (f)用注射器推動介質(zhì)來填充連接器管道
· 當(dāng)連接器管道*充滿時(圖2a),將其插入第二張載玻片的接口上(圖2b-d)。
· 如果要連接兩個以上的載玻片,將第二個連接器管放在第二個載玻片空的另一端口上,用注射器推入介質(zhì),依此類推。
· 慢慢連接的所有載玻片將注射器從適配器上卸下(圖2e)。
· 要將載玻片連接到灌注套件,兩個Luer容器必須在頂部填充培養(yǎng)基。可用紙巾擦去過多的培養(yǎng)基。
圖2:(a)連接管已*充滿; (b-c)將連接器管插入第二載玻片的魯爾接頭上; (d)帶有適配接頭管連接; (e)取下注射器; (f)擦去溢出的介質(zhì),并填充儲液罐以連接到灌注套件。
5. 連接到灌注裝置
將載玻片連接到灌注套件
圖片串聯(lián)安裝帶有兩個µ-Slides I Luer的一個流體單元。